DETERMINACIÓN DE PCNA Y TUNEL EN LAS VELLOSIDADES PLACENTARIAS PORCINAS

Autores:  González, S; Fiorimanti, M; Sanchis, G; Cristofolini, A; Díaz, T; Merkis, C.  Área de Microscopía Electrónica, Dpto. de Patología Animal, Facultad de Agronomía y Veterinaria, Universidad Nacional de Río Cuarto. 

INTRODUCCIÓN 

 La placenta promueve la provisión de nutrientes y oxígeno desde la circulación materna hacia el feto y es esencial para el crecimiento fetal. Con el avance de la preñez, para soportar el incremento en masa fetal, la placenta requiere de una adaptación tisular que involucra desarrollo y remodelación de los tejidos (1). El desarrollo placentario depende de la progresión del ciclo celular, el cual involucra la participación de proteínas tales como el antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA) (2). Si bien PCNA fue por mucho tiempo considerado como un mero marcador de proliferación, evidencias recientes demuestran que está además involucrado en la replicación y reparación del ADN (3). La apoptosis es un tipo de muerte celular programada controlada a nivel génico, con un rol activo en la remodelación de tejidos placentarios en diversas especies (4). Alteraciones en la regulación de la proliferación celular y la apoptosis pueden directa o indirectamente llevar al retardo del crecimiento fetal o a la pérdida de la preñez (5). El objetivo del presente trabajo fue determinar la expresión del marcador de proliferación PCNA y el índice apoptótico a través de TUNEL en las vellosidades placentarias porcinas a lo largo de la preñez. 

MATERIAL Y MÉTODOS

 Se utilizaron tejidos placentarios de cerdas mestizas de 30, 60, 80 y 90 días de gestación, provenientes de frigoríficos de la zona de Río Cuarto, Argentina (33,11º S, 64,3º O). Las muestras fueron fijadas en formol salino tamponado y procesadas a través de la técnica histológica convencional. Se realizaron cortes histológicos de ±4 µm. Para la inmunolocalización de PCNA se utilizaron anticuerpos anti-PCNA (Santa Cruz Biotechnology Inc.) y anticuerpos secundarios (Cell Marque). Se evaluaron 5 campos al azar de vellosidades placentarias fetales y 5 de vellosidades maternas por muestra, por período gestacional, para cada una de las determinaciones. Los resultados se expresaron como % PCNA (nº de células marcadas/nº de células totales x 100). Para la determinación del índice apoptótico (IAp= nº de células marcadas/nº de células totales x 100) a partir de la detección in situ de apoptosis se empleó el ensayo TUNEL a través del equipo comercial ApopTag® Plus Peroxidase in situ (Millipore). Los datos obtenidos se analizaron estadísticamente con el software InfoStat para evaluar la dependencia del % PCNA y del índice IAp con respecto al período gestacional. 

RESULTADOS 

El análisis estadístico reveló que existe efecto del día de gestación sobre el % PCNA en las vellosidades placentarias fetales (p=0,0247) y maternas (p=0,0067). En ambos casos, la mayor proliferación celular se observó a los días 30 y 80 de preñez, y la menor al día 90 en que no se detectó marcación del antígeno nuclear (p≤0,05) (Gráfico 1). El test de Kruskal Wallis demostró efecto del estadío gestacional sobre el IAp en las vellosidades placentarias fetales (p?0,0001) y maternas (p?0,0001). Ambos tipos tisulares presentaron la mayor remodelación celular por apoptosis al día 90 (p≤0,05) (Gráfico 2).

DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN 

Los resultados obtenidos tras la determinación de PCNA son coincidentes con lo hallado en las vellosidades placentarias porcinas a través del marcador de proliferación celular Ki67 (1). Al ser PCNA una molécula involucrada también en los mecanismos de reparación del ADN resulta esperable que los valores obtenidos superen ampliamente los detectados a través de Ki67. Esto iría en consonancia con la relevancia de PCNA en tejidos que se hallan en continuo desarrollo. Por otra parte, el presente estudio revela la intensa remodelación que sufre la placenta en la preñez temprana y avanzada. En períodos tempranos la apoptosis sería responsable de la remodelación de la interfase placentaria para favorecer el contacto maternofetal (4). En la preñez avanzada del día 90, la apoptosis participaría en la transformación de las vellosidades secundarias en terciarias, para incrementar la superficie de contacto y con ello la captura de nutrientes (1). La relación inversa en este período entre proliferación y apoptosis condice con lo previamente informado (4). Este estudio demuestra una vez más la relevancia de ambos procesos durante el desarrollo de las vellosidades placentarias, donde las células eliminadas durante la remodelación por apoptosis son reemplazadas a través de la activa proliferación celular.