Todos los seres vivos sobre la tierra somos como somos, porque tenemos una información genética específica que proviene de nuestros antepasados. Se denomina gen a la estructura que contiene esta información genética. Básicamente un gen es una molécula de ADN, la que posee una secuencia (de nucleótidos) característica que identifica a cada ser vivo.
Lo que hace la PCR es amplificar selectivamente un segmento en particular de ADN tantas veces como sea necesario para poder ser detectado. Podría pensarse de una manera muy simple, que es una “fotocopia molecular”. Esta amplificación se logra gracias a una determinada cantidad de ciclos (entre 30 y 40) con diferentes temperaturas (94ºC, 60ºC y 72ºC por ejemplo) que junto con otros reactivos (Taq polimerasa, dNTPs, cloruro de magnesio, cebadores específicos), nos permiten la obtención del producto final: un amplímero, es decir, el segmento de ADN que buscábamos, amplificado. Por cada molécula de ADN presente en la muestra inicial, se obtienen alrededor de un millón de copias (figura 1), por eso nos permite detectar patógenos en muy pequeñas cantidades, siendo esta una de las mayores ventajas que posee la técnica.
La PCR tiene numerosas aplicaciones como el clonado de genes, el diagnóstico de enfermedades genéticas, pruebas de paternidad, análisis forense y control de calidad industrial entre otras. Hablando concretamente de enfermedades infecciosas de los porcinos, se puede decir que existen PCR para la detección de todos los microorganismos que afectan a los cerdos. Es de elección usar esta técnica cuando otras, como la bacteriología por ejemplo, no pueden ayudarnos en el diagnóstico, tal es el caso de Mycoplasma hyopneumoniae (causante de la neumonía enzoótica), Brachyspira pilosicoli e hyodisenteriae (causante de la espiroquetosis intestinal porcina y la disentería porcina respectivamente) y Lawsonia intracellularis (causante de la Ileitis proliferativa y Adenomatosis intestinal porcina), que son microorganismos difíciles de aislar.
También es muy útil en la identificación de bacterias que presentan más de un serotipo o variedad, como Actinobacillus pleuropneumoniae (causante de la pleuropneumonia porcina), Pasteurella multocida o de las enfermedades llamadas reemergentes, causadas por Actinobacillus suis, Streptococcus suis y Haemophilus parasuis las cuales si bien son fáciles de aislar, con el cultivo no se sabe de qué variedad se trata, y conocer esto puede ser muy importante, por ejemplo, para elegir alguna vacuna comercial que contenga el serotipo presente en nuestra granja.
Su aplicación ha permitido grandes avances en investigación, como estudios de dinámica de distintas enfermedades permitiendo saber cuándo se infectan los animales, la diseminación de los microorganismos o la identificación precisa de algún serotipo o biotipos. La aplicación a campo tiene también sus ventajas, en el caso de Mycoplasma hyopneumoniae, determinar la prevalencia por PCR al destete, nos permite predecir cuál va a ser la severidad de la enfermedad en animales de desarrollo y terminación, permitiendo tomar medidas como la implementación de algún tratamiento antibiótico antes de que sea demasiado tarde.
El uso de monitoreos de PCR solamente o en forma conjunta con perfiles serológicos nos puede ayudar a decidir con más certeza, en qué momento vacunar. Nos permite también determinar si dos agentes son genéticamente iguales o no, esto es útil, por ejemplo, a la hora de determinar si ante un brote de cualquier enfermedad, el agente responsable fue el que estaba presente en la granja o fue introducido desde el exterior, ya sea por animales de reposición o por fallas en la bioseguridad. Es además una técnica rápida, puesto que en pocas horas podemos tener los resultados, versus otras técnicas que pueden demorar días o hasta semanas para arribar al mismo diagnóstico y es versátil desde el punto de vista de la toma de muestra ya que puede usarse casi cualquier tipo de muestra (semen, sangre, hisopados nasales o rectales, biopsias, materia fecal, etc.)
Como toda técnica diagnóstica tiene sus desventajas: la falta de estandarización entre diferentes laboratorios, la necesidad tanto de mano de obra como de laboratorios especializados para realizarla y un costo relativamente alto en comparación con otras técnicas son algunas de ellas.
Es sólo una herramienta diagnóstica más que al usarse junto a otras, como la bacteriología, virología y la serología nos muestra otra faceta más de la enfermedad y del agente patógeno involucrado.
Autor: M.V. M.Sc. Pablo Tamiozzo [email protected]
