1-Fac de Ciencias Veterinarias. UNLPam. Calle 116 esq. 5 General Pico. La Pampa. República Argentina.
2-FacCiencias Veterinarias. UNLP.
3- Escuela de Veterinaria. UNRN.
INTRODUCCIÓN
En el procesamiento de las muestras para microscopía óptica el formol es utilizado como fijador. El formaldehído al 10%, produce ligaduras cruzadas en los tejidos (“cross-links”) que se establecen entre cadenas polipeptídicas. Se han acumulado evidencias contradictorias respectos a los efectos del formaldehído sobre los antígenos tisulares en cuanto a la inmunorreactividad de los mismos. Una de las formas de desenmascarar los antígenos es realizar técnicas de recuperación antigénica. El objetivo de este trabajo fue comparar tres métodos de recuperación antigénica en tejidos placentarios y úteros vacíos de hembras porcinas para la determinación de receptores de progesterona (RP).
MATERIAL Y MÉTODOS
Se utilizaron muestras placentarias de cerdas de ±32 días de gestación (n=4) y útero de cerdas vacías cíclicas (n=4). Placentas: las placentas porcinas (maternas y fetales) y los úteros vacíos fueron procesados para microscopía óptica y su posterior determinación inmunohistoquímica. Recuperación Antigénica: se utilizaron tres técnicas de recuperación antigénica: 1) vaporiera y solución recuperadora de citrato 0.01 M con 0.05% de Twen 20, a pH 6 durante 40 minutos; 2) Proteinasa K de Sigma, dilución 1/200, a 37°C durante 10 minutos; 3) microondas (potencia 30%) y solución recuperadora de citrato 0.01 M con
0.05% de Twen 20, a pH 3 y a pH 6, 4 veces durante 4 minutos.
Inmunohistoquímica: la determinación de los RP se realizó por una técnica de inmunoperoxidasa mediante el uso de un anticuerpo de conejo policlonal anti-receptor de progesterona. Se observó con un microscopio axiophot (Zeiss). La adquisición de imágenes se realizó con una cámara Canon, Powershot G6, de 7.1 megapixeles
(Japón).
RESULTADOS
RP en Placenta porcina de 32 días de gestación, con recuperación antigénica microondas a pH 3
Losresultadosdelarecuperaciónantigénica para
RPen placentasyúterosporcinosseexpresan
en lastablasIyII.
Tabla I. Expresión de RP en placentas porcinas de 32 días de gestación, con diferentes técnicas de recuperación. (-) negativo; (+) baja positividad; (++) positividad intermedia y (+++) alta positividad.
Tabla II. Expresión de RP en úteros vacíos (UV), con diferentes técnicas de recuperación. (-) negativo; (+) baja positividad; (++) positividad intermedia y (+++) alta positividad.
DISCUSIÓN
La inmunomarcación de las muestras de úteros vacios analizadas arrojó resultados diferentes de acuerdo a cada una de las técnicas de recuperación. En placentas porcinas para la determinación de los RP la técnica de elección sería Microondas con solución recuperadora de citrato a pH 3.
